(12)牛舌草多糖对DNA氧化损伤的面法保护作用
参考文献中的方法,取0.4mLlmmol/L的优化艺及A氧EDTANa溶液、0.4mL5mg/mL的牛舌DNA溶液、0.35mL5mmol/L的草多H2O2溶液、0.2mL3.2mmol/L的糖提FeCl3溶液和1mL不同质量浓度的精制多糖一磷酸缓冲溶液(浓度为0.2mol/L,pH=7.4),取工其对加入0.35mL1.2mmol/L的化损VC溶液,在55℃水浴中反应,保护时间为20min,作用随后向试管中快速加入0.35mL0.3mol/L硫代巴比妥酸(TBA)溶液和0.75mL0.6mol/L三氯乙酸溶液,面法在105℃烘箱中显色15min,优化艺及A氧放冷后离心,牛舌取上清液测定532nm处吸光度,草多以磷酸缓冲溶液作为空白对照,糖提根据下面的取工其对公式计算多糖对-OH诱导的DNA氧化损伤的保护作用:
其中:A0为氧化损伤组(磷酸缓冲溶液+反应体系)吸光度;A1为多糖保护组(多糖溶液+反应系)吸光度。
二、结果与分析
1、单因素试验结果与分析
(1)料液比对牛舌草多糖提取率的影响
精密称取5份牛舌草粉末各0.5g,置50mL具塞锥形瓶中,分别加入5mL、10mL、15mL、20mL、25mL蒸馏水,超声30min(室温,功率200W),离心,得样品提取液,精密吸取牛舌草提取液0.5mL测定多糖含量,结果见图1,从实验结果可以看出20mL溶剂的多糖含量最高,故选择0.5g药材加20mL蒸馏水(料液比为1∶40)作为提取溶剂的量。
(2)提取时间对牛舌草多糖提取率的影响
精密称取5份牛舌草粉末各0.5g,置50mL具塞锥形瓶中,加20mL蒸馏水超声提取10min、20min、30min、40min、50min(室温,功率200W),离心,得样品提取液,精密吸取牛舌草提取液0.5mL测定多糖含量,结果见图2,从实验结果可以看出,超声30min和40min时多糖提取效率较高,但考虑到时间成本,因此选用超声30min作为提取时间。
(3)超声功率对牛舌草多糖提取率的影响
精密称取5份牛舌草粉末各0.5g,置50mL具塞锥形瓶中,加20mL蒸馏水分别在50W、100W、150W、200W和250W超声提取30min,测定多糖含量,结果见图3,从实验结果可以看出,超声功率为200W时的多糖含量最高,因此选用200W作为超声提取功率。
(4)提取次数对牛舌草多糖提取率的影响
精密称取5份牛舌草粉末各0.5g,置50mL具塞锥形瓶中,加20mL蒸馏在200W分别超声提取1次、2次、3次、4次和5次,每次30min,测定多糖含量,结果见图4,从实验结果可以看出,随着提取次数增加,多糖含量也升高,但提取3次后多糖含量升高不明显,因此选用超声3次作为提取次数。
2、响应面试验结果
(1)模型的建立和数据分析
根据单因素实验结果,以料液比(A)、提取时间(B)、超声功率(C)、提取次数(D)为实验因素,利用Design-Expert8.0.6软件设计四因素三水平实验分析,共计29个实验,响应面实验方案和结果见表3。
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