2种仪器优化后的液相条件:柱温为40℃,样品室温度为10℃,中种进样体积为5μL.流动相A为0.1%甲酸水溶液;流动相B为甲醇.梯度洗脱程序设置为:(1) UPLC-QTOF:0~2.5 min,氟喹20%B;2.5~2.6 min,20%~100%B;2.6~3.6 min,100%B;3.6~3.7 min,100%~20%B;3.7~4.5 min,20%B.流速为0.5 m L/min.(2) UPLC-TQMS:0~2.5 min,10%B;2.5~2.6 min,10%~100%B;2.6~3.6 min,100%B;3.6~3.7 min,100%~10%B;3.7~4.5 min,10%B.流速为0.5 m L/min.
与乙腈相比,当有机相为甲醇时,诺酮色谱峰的水样分离度更高,且由于甲醇在氢键作用下是中种较强的质子供体,可提高目标物的氟喹灵敏度.不同的酸度会对目标物离子化效果、峰形和响应强度造成影响.甲酸的诺酮加入不仅使其峰形更加对称和尖锐,且利于FQs的水样离子化,得到较强的中种响应.以环丙沙星为例,在不同流动相条件下的氟喹色谱峰见图1A.0.1%甲酸水溶液-甲醇流动相为本实验最优流动相,用于后续实验.目标化合物的诺酮响应强度随柱温的升高而增强(图1B),考虑到柱温对色谱柱寿命的水样影响,故选取40℃作为最佳柱温.图2为环丙沙星在UPLC-QTOF上的中种3种模式(MSE、Full scan、氟喹MRM)和UPLC-TQMS的MRM模式下定量离子的色谱图.
2台仪器各个采集模式下,目标物的线性范围、线性方程见表3和表4,各模式下目标物线性方程的相关系数(R2)均大于0.99,表明其在相应的范围内有良好的线性关系.崔敬鑫等[22]研究中FQs的线性范围为5~100μg/L,本文方法的线性范围与其方法的线性范围相当.
在UPLC-TQMS上,目标物的检出限和定量限分别为0.08~0.10μg/L和0.32~0.92μg/L,在UP-LC-QTOF上,检出限和定量限为0.04~0.22μg/L和0.17~0.90μg/L,2台仪器均显示出较高的灵敏度.对比其他文献报道的方法,本方法对目标物的检出限与定量限均低于或接近于其他方法的检出限与定量限,且本方法的分析时间较短.
很明显2台仪器的MRM采集模式所需的数据存储空间更小(表3、4),且UPLC-QTOF上MRM模式更具节省存储空间的优势.对比之下,MS和MSE模式占据的存储空间主要用于存储更多的样品质谱信息.
对3种不同质量浓度的FQs混标工作液重复测定6次,以考察仪器的精密度,测定浓度的重复性结果如表5所示.结果表明:用UPLC-TQMS测定的相对标准偏差在1.2%~3.3%之间.在UPLC-QTOF的MS/MSE/MRM模式下,测定的相对标准偏差分别为0.8%~3.8%、0.7%~11%和0.5%~6.7%,表明该检测方法有良好的重现性.可以看出2台仪器的精密度良好.
2.6环境样品分析
将实际环境样品于2台仪器各模式下进行检测,均只有OFX被检出,其他4种喹诺酮质量浓度低于检出限.定量数据均由Mass Lynx4.1软件中的Target Lynx计算得到(表6).2台仪器各模式下所测定的样品1与样品2的质量浓度呈现一致的大小规律,且平行测试之间偏差较小.UPLC-QTOF的MSE和UPLC-TQMS上测定的质量浓度无显著性差异,但是UPLC-QTOF的MRM模式和MS模式下检出的质量浓度高于UPLC-TQMS,可能是不同仪器和不同模式下的基质效应存在显著差异.
本研究采用超高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱,建立了5种FQs的定量检测方法,各目标物在3种检测模式(MS/MSE/MRM)下的方法检出限在0.04~0.22μg/L之间,相对标准偏差(RSD)在0.5%~11%之间.通过与超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱法比较发现,超高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱具有与超高效液相色谱-质谱同样出色的定量能力和仪器精密度.而高分辨飞行时间质谱还可对目标物准确定性,从而有效降低质谱MRM模式下假阳性的情况.因此,本文为氟喹诺酮类抗生素的快速、准确定量分析提供了一种可靠的方法,具有较强的实用价值.
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